<div>Hello!</div>
<div>I&#39;m using COM pulling with distance constraint between two domains of a protein. The energy minimization and a 100-ps equilibrating process in the NPT ensemble with position restraints on protein atoms all passed OK. Then I applied a distance constraint between COM of two domains and performed the simulaiton in the NPT ensemble. But after the first few steps I received such warnings:</div>

<div><br clear="all">Step 7  Warning: pressure scaling more than 1%, mu: 1.03819 1.03819 1.03819</div>
<div>Step 8  Warning: pressure scaling more than 1%, mu: 0.98123 0.98123 0.98123</div>
<div>Step 9  Warning: pressure scaling more than 1%, mu: 0.746615 0.746615 0.746615</div>
<div>Step 10  Warning: pressure scaling more than 1%, mu: 1.34141 1.34141 1.34141</div>
<div>Step 10, time 0.02 (ps)  LINCS WARNING<br>relative constraint deviation after LINCS:<br>rms 0.017756, max 0.670789 (between atoms 3187 and 3188)<br>bonds that rotated more than 30 degrees:<br> atom 1 atom 2  angle  previous, current, constraint length<br>
   4334   4336   41.3    0.0813   0.1101      0.1090<br>   4334   4335   39.2    0.0813   0.1090      0.1090<br>   4332   4334   32.1    0.1139   0.1548      0.1529<br>   4325   4326   34.5    0.0813   0.1091      0.1090<br>
   4299   4301   31.1    0.1077   0.1468      0.1449<br>   4293   4296   34.5    0.0814   0.1086      0.1090<br>   4284   4285   30.6    0.0812   0.1093      0.1090<br>   4225   4226   64.8    0.0812   0.1144      0.1090<br>
   4208   4210   31.0    0.1140   0.1522      0.1529</div>
<div> </div>
<div>and then the program exited for too many LINCS warnings.</div>
<div>The following two changes lead to no problem:</div>
<div>(1) distance constraint between COM of two domains is applied, but the simulation is done in the NVT ensemble;</div>
<div>(2) distance restraint using an umbrella potential instead of distance constraint is applied, and the simulation is done in NPT.</div>
<div>So can anyone tell me what the problem is?</div>
<div>Thanks in advance.</div>
<div><br>-- <br>SUN Li<br>Department of Physics<br>Nanjing University, China<br></div>